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qPCR(Quantitative PCR,实时荧光定量 PCR)是一种通过实时监测荧光信号变化,对核酸进行定量分析的分子生物学技术。与传统 PCR 相比,qPCR 可在扩增过程中动态检测目标 DNA 的累积情况,从而实现更高灵敏度与更准确的定量分析。
由于具有高灵敏度、宽动态范围及良好的重复性,qPCR 已广泛应用于基因表达分析、病原体检测、多重核酸检测及分子诊断等研究与检测领域。
qPCR 通过在 PCR 扩增过程中实时检测荧光信号变化,实现对目标核酸的动态定量分析。随着扩增产物逐渐增加,荧光信号同步增强,并形成典型扩增曲线。系统基于 Ct 值对目标核酸初始浓度进行定量分析。
常见的 qPCR 检测方式包括 SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法。
SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法在检测原理、特异性、多重检测能力及适用场景方面各有特点,可根据实验需求进行选择。
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SYBR Green 检测 |
TaqMan 检测 |
检测原理 |
双链 DNA 结合染料产生荧光 |
特异性探针释放荧光信号 |
特异性 |
中等* |
高 |
灵敏度 |
中等* |
高 |
多重检测 |
不支持 |
支持 |
是否需要探针 |
否 |
是 |
引物设计难度 |
较低 |
较高 |
实验成本 |
较低 |
较高 |
数据分析 |
需结合熔解曲线分析 |
背景更低,结果更稳定 |
适用场景 |
常规基因表达分析 |
病原检测、多重检测 |
推荐应用 |
RT-qPCR、基因定量 |
Multiplex qPCR、低丰度检测 |
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*SYBR Green 检测特异性和灵敏度受引物设计与模板质量影响
Fisher Bioreagents™ qPCR 预混液基于优化的酶与缓冲体系设计,可提供稳定扩增性能、高重复性与优异模板兼容性,适用于从常规基因表达分析到高特异性多重检测等多种 qPCR 应用场景。
在分子生物学实验中,PCR 只是其中关键一步。要获得稳定、可重复的结果,还需要从样品制备到下游分析的每一个环节协同优化。
Fisher Bioreagents飞世尔围绕完整实验流程,提供覆盖样品制备、反转录、PCR / qPCR 扩增、电泳分析及酶切克隆的一站式解决方案。各产品经过体系优化与应用验证,能够在不同实验步骤中实现稳定衔接,减少人为变量,提高实验成功率。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。