HRP二抗放4℃还是−20℃？

HRP（horseradish peroxidase，辣根过氧化物酶）标记二抗广泛应用于 Western blot 等免疫检测实验。HRP 二抗的复溶方式和保存条件取决于产品状态、缓冲体系及预计使用周期。合理的复溶、分装和保存有助于维持抗体活性，并减少因反复冻融、温度变化或污染导致的实验结果波动。

本文介绍冻干型和液体型 HRP 二抗在复溶、分装、保存以及稀释后工作液使用中的基本原则。

HRP 标记二抗常见的产品形式包括冻干型（lyophilized）和液体型（liquid）。不同产品形式对应的初始处理和保存方式有所不同。

冻干型 HRP 二抗通常需要按照产品说明书使用指定溶剂和体积进行复溶。复溶后的保存条件应结合产品配方和预计使用周期确定。

液体型 HRP 二抗通常已经配制于特定缓冲体系中，无需再次复溶。缓冲液中可能含有蛋白稳定剂、防腐剂、甘油或其他组分，因此不建议直接套用冻干产品的复溶或保存方式，应按照具体产品说明书推荐的条件保存。

甘油与长期保存

对于部分冻干 HRP 二抗，产品说明书可能会推荐在复溶后加入甘油用于长期保存。例如，以Fisher Bioreagents 山羊抗小鼠 HRP 二抗（FB03100200）为例：

短期使用：加入 2.0 mL 蒸馏水复溶，配制成 0.8 mg/mL 溶液，置于 2–8℃保存，并在数天至 1 周内使用。

长期使用：加入 1.0 mL 蒸馏水复溶后，再加入 1.0 mL 甘油混匀，按使用计划分装，于 −20℃保存，稳定期约 1 年。

具体条件仍应以对应产品说明书为准。

甘油浓度的计算

对于产品说明书推荐加入等体积甘油进行长期保存的 HRP 二抗，可根据最终总体积计算甘油浓度。例如：1 mL HRP 二抗溶液 + 1 mL 甘油 = 2 mL 最终溶液。因此，最终溶液中的甘油浓度约为 50% (v/v)。

甘油可降低溶液的冰点，使含甘油的抗体溶液在 −20℃条件下不易完全冻结，从而减少完整冻结—解冻循环可能造成的影响。

需要注意的是，并非所有 HRP 二抗均适合自行加入甘油。对于液体产品或采用其他稳定体系的产品，应按照对应产品说明书操作。

长期保存时是否需要分装？

如果 HRP 二抗预计需要较长时间使用，可根据使用频率和单次用量进行合理分装。

分装的主要目的在于减少反复开盖、取用以及温度变化。即使加入甘油，也不意味着可以无限次反复开盖或经历温度变化。因此，对于长期使用的产品，应根据实际使用计划选择合适的分装体积。

与冻干型 HRP 二抗不同，液体 HRP 二抗通常已经配制于厂家设计的缓冲体系中，使用前无需再次复溶。

液体产品的保存条件应根据具体产品说明书确定。由于其缓冲体系中可能已经包含蛋白稳定剂、防腐剂、甘油或其他成分，因此不建议自行加入甘油或改变其保存体系。对于液体 HRP 二抗，应遵循产品说明书中规定的储存条件，并在推荐的有效期内使用。

HRP 二抗在 Western blot 等实验中通常需要进一步稀释后使用。此时需要注意，原液的保存期限不能直接用于判断稀释后工作液的稳定性。

HRP 二抗经数千倍甚至数万倍稀释后，工作液中的抗体浓度显著降低，原液中的稳定体系也会随之被稀释。因此，不能简单地依据原液的保存期限判断稀释后工作液的保存时间。

对于已经用于膜孵育的二抗工作液，其有效浓度还可能受到样品、孵育时间、污染以及保存条件等因素影响，从而增加实验结果波动的风险。

因此，为获得更加稳定和可重复的实验结果：建议根据实验所需体积配制 HRP 二抗工作液，并现配现用。

1、确认产品形式

首先确认 HRP 二抗为冻干型还是液体型。

2、根据预计使用周期确定保存方式

短期和长期使用可能对应不同的复溶及保存条件。

3、甘油添加和分装应依据具体产品要求

不同 HRP 二抗的配方和稳定体系不同，应以产品说明书为准。

4、稀释后的工作液建议现配现用

避免直接按照原液的保存期限判断工作液稳定性。

EazeBind™ HRP 标记二抗

EazeBind HRP 二抗系列覆盖山羊抗小鼠、山羊抗兔和山羊抗大鼠 HRP 二抗。具体推荐稀释比例应根据产品说明书及实际实验条件进行优化。

查看 EazeBind HRP 二抗

• Western blot 技术手册
• Fisher Bioreagents产品手册